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細胞簡介：

小鼠鞏膜成纖維分離自鞏膜組織，鞏膜是眼球壁的主要組成之一。是眼球纖維膜的后5/6部分。前方聯接角膜，后方與視神經的鞘膜延續。鞏膜在視神經穿出部附近厚，愈前愈薄，在肌腱附著處又復增厚。其與角膜交界處，外面有環形的角膜溝，深部有鞏膜靜脈竇。小兒的鞏膜為淺藍色，成年為白色，老年因脂肪沉著而帶黃色。鞏膜結構堅韌，有支持和保護眼內組織的作用。成纖維細胞是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來；成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的肺成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠鞏膜成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠鞏膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳1-3代左右

消化液 0.25%

培養條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

大鼠質細胞源性神經營養因子(GDNF)檢測試劑盒 ，英文名： GDNF ELISA Kit

Mouse collagenase type I (Collagenase I) ELISA Kit 小鼠膠原酶I(Collagenase I)檢測試劑盒

MousePeosidineELISAKit 小鼠戊糖素(Peosidine)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforHumanphospho-exacellularsignal-regulatedkinase,pERKELISAKit人0酸化細胞外信號調節激酶

通用樣品稀釋緩沖液100毫升

大鼠卵巢癌標志物CA125ELISAKit大鼠卵巢癌標志物CA125ELISAKit，大鼠卵巢癌標志物CA125ELISAKit，

TBCB重組人 TBCB 蛋白 Protein

STAT5(signal transducers and activators of transduction5 0.5mgSTAT5(signal transducers and activators of transduction5) 信號轉導和轉錄激活因子5(STAT5)抗原

YWHAB重組人 14-3-3 beta / YWHAB 蛋白 (GST 標簽) Protein

FZD10 Protein Human 重組人 Frizzled-10 / FZD10 蛋白

SLITRK1 Protein Human 重組人 SLITRK1 蛋白

STAT5(signal transducers and activators of transduction5 0.5mgSTAT5(signal transducers and activators of transduction5) 信號轉導和轉錄激活因子5(STAT5)抗原

FZD10 Protein Human 重組人 Frizzled-10 / FZD10 蛋白

TBCB重組人 TBCB 蛋白 Protein

SLITRK1 Protein Human 重組人 SLITRK1 蛋白

YWHAB重組人 14-3-3 beta / YWHAB 蛋白 (GST 標簽) Protein

小鼠補體蛋白3(C3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat Pro aial naiuretic peptide (Pro-ANP) ELISA Kit 大鼠前心肽(Pro-ANP)檢測試劑盒

HumanPyruvateKinase,M2-PKELISAKit 人酸激酶M2型同工酶(M2-PK)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanBonemorphogeneticproteieceptor1A,BMPR-1A檢測試劑盒人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)檢測試劑盒規格：96T/48T

植物總吲哚-3-乙酸(IAA)熒光定量檢測試劑盒(包括萃取)20次

HumanStemcellfactor/mastcellgrowthfactor，SCF/MGFELISAKit人干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)檢測試劑盒規格：96T/48T

小鼠鞏膜成纖維細胞兔子孕激素檢測試劑盒   兔子孕激素試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子孕激素試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子孕激素試劑盒、兔子孕激素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔子胰島素樣生長因子1檢測試劑盒   兔子胰島素樣生長因子1試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子胰島素樣生長因子1試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子胰島素樣生長因子1試劑盒、兔子胰島素樣生長因子1eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔子胰島素樣生長因子2檢測試劑盒   兔子胰島素樣生長因子2試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子胰島素樣生長因子2試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子胰島素樣生長因子2試劑盒、兔子胰島素樣生長因子2eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

兔子組織型纖溶酶原激活劑檢測試劑盒   兔子組織型纖溶酶原激活劑試劑盒   規格型號：96T/48T   兔子組織型纖溶酶原激活劑試劑盒，規格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進口分裝），產品別名：兔子組織型纖溶酶原激活劑試劑盒、兔子組織型纖溶酶原激活劑eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質期：6個月。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養條件一致，若由于培養條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養基重懸細胞，并接種到新的培養瓶或培養皿中，置于培養箱中進行培養。

5. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養基(灌液培養基)不能再用來培養細胞，請換用按照說明書細胞培養條件新配制的*培養基來培養細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。