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產品名稱:細胞核分離提取試劑盒(高純度)

產品特點:細胞核分離提取試劑盒(高純度)的相關產品:Cytochrome C (抗原 0.5mgCytochrome C (抗原)
FGFR1 Protein Human 重組人 FGFR1 / CD331 蛋白 (His & GST 標簽)
CDH13重組大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 蛋白 Protein

產品型號:

更新日期:2024-11-19

訪問次數:95

細胞核分離提取試劑盒(高純度)的詳細資料:

產品僅供研究使用,不適用于人類或臨床診斷
商品屬性:

產品英文名稱:Nuclei Extraction Kit (High Purity)

產品中文名稱:細胞核分離提取試劑盒(高純度)

規格:20 T/100 T

貨號:EY-01X8552
用途:僅供科研研究實驗

特點&優勢:

  從哺乳動物細胞和組織中,快速分離提取純的脆弱的細胞核

  通過稠密的蔗糖墊層進行超速離心,以保護細胞核并去除細胞膜和細胞質污染物。

保存建議:請參閱說明書中各個組分的存儲條件。自發貨之日起,在推薦溫度下至少穩定12個月。

運輸條件:藍冰運輸

背景

從細胞核制備提取物通常是許多細胞生物學研究的第一步,例如體外細胞凋亡,細胞轉錄狀態檢測和核組分來源(染色質,基因組DNA,組蛋白和核RNA / RNP)。

細胞核分離提取試劑盒(高純度)

本產品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發性的有機溶劑來溶解甲臜產物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數后可放回溫箱繼續孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產品:

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FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His 標簽)

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操作步驟:

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物。

(二)構建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞。

(四)誘導表達

1、挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。


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