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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

參數(shù)規(guī)格：

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

4-(4-溴)吡分子式：212.04英文名稱：4- (4-) pyridine：39795-60-3分子量： C8H6BrNO

3-甲-5-(2-羥乙)-4-甲噻唑啉氯英文名稱：3- -5- (2- hydroxy ethyl benzene methyl) -4- methyl thiazole chloride分子式：269.79分子量： C13H16ClNOS：4568-71-2

水合物分子式：446.14英文名稱：Ferrous sulfate hydrate：22830-45-1分子量： C12H22FeO14·xH2O

2,3,5,6-四溴對二甲分子式：421.75英文名稱：2,3,5,6- four xylene bromine：23488-38-2分子量： C8H6Br4

4-戊氧-4'-聯(lián)(5OCB)分子式：265.35英文名稱：4- pentyloxy -4'- cyano biphenyl (5OCB)：52364-71-3分子量： C18H19NO

亞硝鐵鉀分子式：330.17英文名稱：Potassium nitroferrocyanide：xcv分子量： K2Fe(CN)5(NO)

(S)-(對甲亞砜)二茂鐵分子式：324.22英文名稱：(S) - (to the base of the toluene and the Er Maotie)：164297-25-0分子量： C17H16FeOS

溶劑紅1英文名稱：Solvent Red 1分子式：278.31分子量： C17H14N2O2：1229-55-6

異葒草苷英文名稱：Isoorientin分子式：分子量：：

馬爾太蟲通用LAMP試劑盒大鼠 DSG4 基因全長ORF克隆

大鼠 E-selectin / ELAM-1 / CD62E 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 PDGFA 基因全長ORF克隆

人 MYL12A 基因全長ORF克隆

人 IL10 / Interleukin-10 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

甲型流感 H1N1 (A/New York/18/2009) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 RPS2 基因全長ORF克隆

人 GRID2 基因全長ORF克隆

人 FUCA2 基因全長ORF克隆

人 EEF1A1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 FAS / CD95 / APO-1 / TNFRSF6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 TIMM23 基因全長ORF克隆