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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。

參數(shù)規(guī)格：

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
圖2 
檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設(shè)置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

1,5-五亞甲-1H-四唑分子式：138.17英文名稱：1,5- five -1H- four：54-95-5分子量： C6H10N4

拉沙里菌素英文名稱：Lachari bacterium分子式：612.77分子量： C34H53NaO8：25999-20-6

鄰三酚紅英文名稱：The adjacent benzene three phenol red分子式：400.36分子量： C19H12O8S：32638-88-3

A-甲吡分子式：英文名稱：A- methyl pyridine：分子量：

4,5-二氯-1,2-二甲咪唑分子式：165.023英文名稱：4,5- two -1,2- two：175201-56-6分子量： C5H6Cl2N2

2,5-二-4,6-二羥嘧分子式：142.12英文名稱：2,5- two hydroxy -4,6- two：40769-69-5分子量： C4H6N4O2

2--3-硝-4-甲吡分子式：153.14英文名稱：2- amino -3- nitro -4-：6635-86-5分子量： C6H7N3O2

1-異喹啉分子式：255.06英文名稱：1- iodide：19658-77-6分子量： C9H6IN

6-氯-7-硝喹喔啉分子式：209.59英文名稱：6- chloro -7- nitro quinoxaline：109541-21-1分子量： C8H4ClN3O2

馬虻LAMP試劑盒人 CD21 / C3DR ELISA配對抗體

人 SNX32 基因全長ORF克隆

食蟹猴 XEDAR / EDA2R 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

大鼠 DSC2 基因全長ORF克隆

食蟹猴 CD1A 基因全長ORF克隆

人 CDK7 & CCNH & MNAT1 Heterotrimer 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 Cadherin-11 基因全長ORF克隆

食蟹猴 EDAR 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CDX4 基因全長ORF克隆

人 EPOR / Erythropoietin Receptor 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 LMAN2L 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CCL3L3 基因全長ORF克隆