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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。

參數(shù)規(guī)格：

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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檢測步驟：
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應體系配制如下表：
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計算好各試劑的使用量，加入一適當體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團：設置為FAM。淬滅基團：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

(R)-3-甲酸乙酯-L-(+)-酒石酸鹽分子式：307.3英文名稱：(R) -3- nipecotate -L- (+) - tartaric acid salt：167392-57-6分子量： C12H21NO8

4-(N,N-二甲磺酰)-7-嗪并氧雜惡二唑分子式：311.36英文名稱：4 -（N，N-二甲磺酰）- 7 -嗪并氧雜惡二唑：139332-64-2分子量： C12H17N5O3S

4,4'-二甲亞砜分子式：230.33英文名稱：4,4'- xylene：1774-35-2分子量： C14H14OS

磺酰草吡唑分子式：362.327英文名稱：The methyl chloride：365400-11-9分子量： C14H13F3N2O4S

蒼術(shù)素英文名稱：Atractylodin分子式：182.22分子量：C13H10O：55290-63-6

2-氯-4-吡分子式：141.56英文名稱：2- -4- pyridine formaldehyde：101066-61-9分子量： C6H4ClNO

乙砜分子式：170.23英文名稱：Ethyl phenyl ketone：599-70-2分子量： C8H10O2S

4-(1H-吡唑-4-)-7-((2-(*硅烷)乙氧)-甲)-7H-吡咯并[2,3-D]嘧分子式：315.451英文名稱：4- (1H-, -4-) -7- (2- (three methyl silicone alkyl) -) -7H- and [2,3-D]：941685-27-4分子量： C15H21N5OSi

5-氟尿嘧分子式：130.08英文名稱：5-：51-21-8分子量： C4H3FN2O2

嗜冷黃桿菌LAMP試劑盒人 EphrinA3 / EFNA3 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 SECISBP2 基因全長ORF克隆

大鼠 APMAP 基因全長ORF克隆

人 CHRDL1 基因全長ORF克隆

食蟹猴 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 Serpinb8 基因全長ORF克隆

小鼠 OBCAM / OPCML 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 CLEC3B 基因全長ORF克隆

狗 ACVR1B 基因全長ORF克隆

小鼠 sFRP-5 基因全長ORF克隆

人 VEGFA 轉(zhuǎn)錄變體4 基因全長ORF克隆

人 PCSK2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽