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產(chǎn)品名稱:豚鼠耳炎諾卡菌LAMP試劑盒
產(chǎn)品特點:豚鼠耳炎諾卡菌LAMP試劑盒上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:人 E2F3 基因全長ORF人 UXS1 基因全長ORF人 CDH16 基因全長ORF小鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細胞裂解液 (陽性對照) 食蟹猴 FCN1 基因全長ORF
產(chǎn)品型號:50次
更新日期:2021-02-26
訪問次數(shù):460
50次豚鼠耳炎諾卡菌LAMP試劑盒的詳細資料:
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 | 豚鼠耳炎諾卡菌LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Nocardia cava |
規(guī)格 | 50次 |
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
檢測步驟:
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
安果(安硫磷)Aflix (An Liulin):257.27C6H12NO4PS2:2540-82-1
間硝酚Inter - Nitro phenol:139.11 C6H5NO3:554-84-7
STC:340.83STC:38800-20-3 C17H13ClN4S
二十一Twenty-one acid:326.56 C21H42O2:2363-71-5
鄰溴四唑:225.05Ortho four:73096-42-1 C7H5BrN4
雙(三氟乙酰氧):430.04Double (three fluorine acetoxy) iodobenzene:2712-78-9 C10H5F6IO4
丙:668.39Propidium iodide:25535-16-4 C27H34I2N4
吖:179.22Acridine:260-94-6 C13H9N
甲氧-甲三氟硼酸鉀:151.964Methoxy methyl - three potassium fluoroborate:910251-11-5 C2H5BF3O.K
豚鼠耳炎諾卡菌LAMP試劑盒人 HYOU1 / HSP12A 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
人 GFM2 基因全長ORF克隆
人 HPX 基因全長ORF克隆
人 E2F3 基因全長ORF克隆
人 UXS1 基因全長ORF克隆
人 CDH16 基因全長ORF克隆
小鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 FCN1 基因全長ORF克隆
人 BTC 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標(biāo)簽
人 MS4A1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標(biāo)簽
人 TREM1 基因全長ORF克隆
小鼠 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
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