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產品名稱:泰澤隱孢子蟲LAMP試劑盒
產品特點:泰澤隱孢子蟲LAMP試劑盒上海一研生物相關產品:Yeast powder 酵母粉 500g 瓶Toluidine Blue O甲苯氨藍O 5g 瓶RNAwait(非凍型組織RNA保存液) 100ml 瓶6-Aminopenicillanic acid 6-氨基青霉烷酸 25g 瓶膠片(100張/盒 5盒/箱) 8×10 盒
產品型號:50次
更新日期:2021-02-07
訪問次數(shù):318
50次泰澤隱孢子蟲LAMP試劑盒的詳細資料:
參數(shù)規(guī)格:
產品名稱 | 泰澤隱孢子蟲LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Cryptosporidium Taize |
規(guī)格 | 50次 |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
Alizarin red 茜素紅 25g 瓶
Clarithromycin 5g 瓶
ONPG 鄰硝基苯-β-D-吡喃半糖苷 1g 瓶
Yeast powder 酵母粉 500g 瓶
Toluidine Blue O甲苯氨藍O 5g 瓶
RNAwait(非凍型組織RNA保存液) 100ml 瓶
6-Aminopenicillanic acid 6-氨基青霉烷酸 25g 瓶
膠片(100張/盒 5盒/箱) 8×10 盒
探針-熒光染料
DH5α受體菌 1ml 支
Coomassie brilliant blue R250 考馬斯亮藍R250 10g 瓶
糞便基因組DNA提取試劑盒 100T 盒
泰澤隱孢子蟲LAMP試劑盒人 HOMER2 基因全長ORF克隆
人 RNASET2 基因全長ORF克隆
人 CCDC153 基因全長ORF克隆
人 PNLIPRP3 基因全長ORF克隆
人 MTOR 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶HA標簽
人 p38 alpha / MAPK14 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 IGFBP7 / IBP-7 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 IGFBP4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 OLA1 基因全長ORF克隆
小鼠 KIM-1 / TIM1 / HAVCR1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 FATE1 基因全長ORF克隆
人 VEGFR3 / FLT4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
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