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HK-2 人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細(xì)胞培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備 角質(zhì)細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基或者 Defined K-SFM ,添加對(duì)應(yīng)因子,1% P/S 來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。
備注:Defined K-SFM培養(yǎng)液包含兩個(gè)組份:基礎(chǔ)培養(yǎng)基1瓶+生長(zhǎng)因子1管
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:培養(yǎng)液92.5%,7.5%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
4)傳代比例:如果沒(méi)有特別說(shuō)明,收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是1:2。傳代周期:4-6天,換液頻率:每周 2-3次。
備注:
1. 該細(xì)胞貼壁較慢,為使細(xì)胞貼壁更容易,建議可提前在培養(yǎng)皿/培養(yǎng)瓶中鋪0.25%的明膠溶液,并于貼壁24~48小時(shí)后再進(jìn)行后續(xù)操作。
2. 該細(xì)胞生長(zhǎng)不能過(guò)密,請(qǐng)?jiān)谏L(zhǎng)密度80%時(shí)進(jìn)行傳代。
3.使用0.05%消化細(xì)胞,由于Defined K-SFM為無(wú)血清培養(yǎng)液無(wú)法終止消化,所以消化完成后要通過(guò)離心(建議125xg離心5到10分鐘)去除或者用帶10%血清的培養(yǎng)基來(lái)終止消化,再進(jìn)行后續(xù)操作。